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技術(shù)文章

ELISA法手工測定的影響因素

點擊次數(shù):14751   發(fā)布時間:2022/1/12 10:23:59

ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復(fù)性好的特點,并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點,因而多年來廣泛應(yīng)用于血站和醫(yī)院的實驗室中,但在測定中常會出現(xiàn)一些誤差和問題。我們通過幾年的實驗觀察,認為影響結(jié)果的因素有如下方面。

1 試劑盒

(1)抗原、抗體活性對效價的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活,結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高,對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高,實驗中空白對照OD值偏高或假陽性。(2)酶結(jié)合物濃度過高,也會導(dǎo)致OD值假性增高。

2 試驗儀器

(1)加樣器是否經(jīng)過校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不精確,會使結(jié)果忽高忽低。(2)每次洗板,應(yīng)檢查洗板機針孔有無堵塞。

3 操作

(1)檢測先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時放回冰箱冷藏,以免造成試驗結(jié)果假性降低。(2)加樣時注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結(jié)果的準確性。(3)洗滌不充分,會使結(jié)果假性增高,過分洗滌呈假陰性。(4)比色時應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時,底部留有水汽,應(yīng)將板底擦干后進行比色,水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高。(5)抗原與抗體反應(yīng)達到完全平衡,依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落,溫度低于4℃,影響反應(yīng)速度。總之,由于ELISA實驗的影響因素較多,在實際工作中必須操作規(guī)范、仔細,避免和排除各種因素的影響,使之得到準確可靠的檢驗結(jié)果。

 

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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